domingo, 21 de diciembre de 2014

ADN Recombinante en la Naturaleza

La recombinación genética es un proceso biológico que se produce normalmente en todos los organismos, tras el cual se produce un cambio del genoma (patrimonio genético del que está dotado un organismo) y se verifica normalmente con la rotura y la reunión del ADN.
La recombinación de eucariotas comúnmente se produce durante la meiosis como entrecruzamiento cromosómico entre los cromosomas apareados. Este proceso conduce a que la progenie tenga diferentes combinaciones de genes de sus padres y puede producir alelos quiméricos. En biología evolutiva se cree que esta mezcla de genes tiene varias ventajas, incluyendo que permite a los organismos que se reproducen sexualmente. En biología molecular,"recombinación" también se refiere a la recombinación artificial y deliberada de piezas de ADN distintas, a menudo de diferentes organismos, creando lo que se llama ADN recombinante.

Enzimas llamadas recombinasas catalizan las reacciones de recombinación natural. RecA, la recombinasa encontrada en Escherichia coli, es responsable de la reparación de las roturas en el ADN de doble hebra. En levaduras y otros organismos eucariotas hay dos recombinasas requeridas para reparar esas roturas. La proteína RAD51 es requerida para la recombinación mitótica y meiótica y la proteína DMC1 es específica de la recombinación meiótica.

Referencias: 
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domingo, 14 de diciembre de 2014

Técnica de Hibridación en Neumonia

Se realizó la prueba OligoDetect®–Mycoplasma pneumoniae (Chemicon), con una mezcla de iniciadores que amplificaron una secuencia de 143 pb del gen ATPasa de M. pneumoniae. Cada reacción tenía un volumen final de 25 µl que contenía una concentración de 200 µM de dATP, dGTP, dTTP y dCTP, 2.5 U de Taq polimerasa, 3 mM de MgCI2, 0.3µM de la mezcla de primers y buffer 1X. Después de una desnaturalización inicial por 1 minuto a 94°C, se realizaron 40 ciclos de desnaturalización por 1 minuto a 94°C, anillaje a 45°C por 30 segundos y elongación a 72°C por 1 minuto. Posteriormente se realizó una extensión final por 8 minutos a 72°C en un ter–mociclador Cycler (Bio–Rad).

La prueba de hibridación in vitro diseñada para detectar la región amplificada del gen de la ATPasa, consistió en una denaturación bajo condiciones alcalinas seguida de una hibridación, cuyos resultados eran determinados mediante la absorbancia de los controles y las muestras.


La aplicación de la técnica molecular usada, PCR–hibridación in vitro, demostró ser de gran utilidad para la detección de M. pneumoniae en hisopados orofaríngeos, ya que la presencia de ácidos nucleicos de M. pneumoniae es frecuente en las muestras respiratorias estudiadas.

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domingo, 7 de diciembre de 2014

Detección de Mycoplasma pneumoniae mediante PCR–hibridación in vitro

T: Detección de Mycoplasma pneumoniae mediante PCR-hibridación in vitro en niños con infección respiratoria.

O: Detección de M. pneumoniae en hisopados orofaríngeos mediante la técnica de PCR-hibridación in vitro para contribuir a la implementación de estrategias diagnosticas que permitan un mejor conocimiento de la situación real de las infecciones respiratorias causadas por él, y el establecimiento de pruebas útiles para un diagnostico preciso que permita una terapéutica específica.
M: Exudado orofaríngeo.
AN: ADN bacteriano extraido con el Kit QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN®)
G: ATPasa de M. pneumoniae.
PCR: PCR-hibridación in vitro.
          D: 40 ciclos por un 1min a 94°.
          H: 72° por 1min.
          E: 45° por 30 segundos en un termociclador Cycler (Bio-Rad).
V: Electroforesis en geles de agarosa al 1.5% teñidos con bromuro de etidio.
C+: Control de amplificación del Kit.
CN: -
C-: Agua bidestilada estéril.
CB: Agua bidestilada estéril.

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