Se realizó la prueba OligoDetect®–Mycoplasma pneumoniae (Chemicon), con una mezcla de iniciadores que amplificaron una secuencia de 143 pb del gen ATPasa de M. pneumoniae. Cada reacción tenía un volumen final de 25 µl que contenía una concentración de 200 µM de dATP, dGTP, dTTP y dCTP, 2.5 U de Taq polimerasa, 3 mM de MgCI2, 0.3µM de la mezcla de primers y buffer 1X. Después de una desnaturalización inicial por 1 minuto a 94°C, se realizaron 40 ciclos de desnaturalización por 1 minuto a 94°C, anillaje a 45°C por 30 segundos y elongación a 72°C por 1 minuto. Posteriormente se realizó una extensión final por 8 minutos a 72°C en un ter–mociclador Cycler (Bio–Rad).
La prueba de hibridación in vitro diseñada para detectar la región amplificada del gen de la ATPasa, consistió en una denaturación bajo condiciones alcalinas seguida de una hibridación, cuyos resultados eran determinados mediante la absorbancia de los controles y las muestras.
La aplicación de la técnica molecular usada, PCR–hibridación in vitro, demostró ser de gran utilidad para la detección de M. pneumoniae en hisopados orofaríngeos, ya que la presencia de ácidos nucleicos de M. pneumoniae es frecuente en las muestras respiratorias estudiadas.
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