Terapia Génica en Neumonia

La bacteria Legionella pneumophila, causante de la enfermedad que lleva su nombre, utiliza proteínas de las células infectadas para construirse una “proteccion” que le permite multiplicarse a sus anchas sin que el organismo hospedador se entere de nada.

Estos son los sorprendentes resultados que publica la revista Proceedings of National Academy of Sciences. Dos proteínas bacterianas, llamadas Ank3 y Lem3, serían las encargadas de modificar a las proteínas del hospedador para convertirlas en materias primas.

Este descubrimiento puede abrir nuevas vías para la síntesis de antibióticos más efectivos, ya que al conocer exactamente cómo actúan estas proteínas se pueden buscar formas más eficaces de bloquearlas.

La terapia génica consiste en la inserción de genes funcionales ausentes en el genoma de un individuo. Se realiza en las células y tejidos con el objetivo de tratar una enfermedad o realizar un marcaje.

Debemos tomar en cuenta que el interferón gamma (IFN-γ) es una de las moléculas fundamentales sobre la que gira la defensa ante multitud de patógenos respiratorios, además saber que los adenovirus producen una reacción de secreción local de INF-γ.

Referencias:

• https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEgR_Q5Xwzsp0OZXiW9yRCNL2cErQkLE7xMonS-Bt5Ec6vin6GGDjL_FsKgKSBnHWfdcbeA63SenfvQp2tCaVo1tFP2J4febkA5Vtvb2sKMm4E8Ru3cS7V4xe0A-BM48dwLzbk9Q4iq1U24/s1600/terapia+genica3.jpg
• http://www.archbronconeumol.org/es/neumonia-adquirida-comunidad-fumadores/articulo/90326066/
• http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0300289613003530

Terapia con Stem Cells

El objetivo principal de este estudio fue probar la hipótesis de que el MSC humanas poseían propiedades antimicrobianas intrínsecas. Se estudió el efecto de MSC humanas derivadas de médula ósea en el crecimiento de las bacterias de Gram-negativas y Gram positiuvas.

Análisis de la expresión de las principales péptidos antimicrobianos indicó que uno de los factores responsables de la actividad antimicrobiana de MSC CM contra las bacterias Gram-negativo fue el péptido antimicrobiano de catelicidina humana, hCAP-18 / LL-37. Tanto m-ARN y los datos de expresión de proteína mostraron que la expresión de LL-37 en MSCs aumentó después de la exposición bacteriana. Utilizando un modelo de ratón in vivo en de E. coli neumonía, la administración intratraqueal de MSCs reduce el crecimiento bacteriano en los homogeneizados de pulmón y en el lavado broncoalveolar (BAL) de fluido, y la administración de las MSC simultáneamente con un anticuerpo neutralizante para LL-37 dio como resultado una disminución en el aclaramiento bacteriano.

Además, el propio BAL de ratones tratados con MSC tenía una mayor actividad antimicrobiana en comparación con el BAL de tampón fosfato salino (PBS) ratones tratados con. MSC derivadas de médula ósea humana poseen actividad antimicrobiana directa, que está mediada en parte por la secreción de catelicidina humana hCAP-18 / LL-37. STEM CELLS 2010; 28: 2229-2238

Referencia:

• http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/stem.544/full
• https://www.youtube.com/watch?v=8WNsArl2qAU

Transgénicos en aplicación a la Neumonía

Un equipo de científicos españoles, dirigido por Luís Enjuanes, del Centro Nacional de Biotecnología (CNB-CSIC) de Madrid, ha desarrollado ratones transgénicos que permitirán estudiar los efectos de virus como el de la neumonía atípica o SRAS (Síndrome Respiratorio Agudo Severo) y experimentar nuevas vacunas. Enjuanes ha explicado que los ratones transgénicos se han hecho susceptibles a un coronavirus humano productor del resfriado común en personas con un sistema inmune normal y de neumonías en personas inmunodeprimidas. En primer lugar, los científicos hicieron que los ratones expresaran el receptor para el virus humano.

Referencia: - http://www.elmundo.es/elmundo/2005/05/24/ciencia/1116922773.html

Taller Virtual: Ratones transgénicos creados por Mario R. Capecchi, Ph. D de la Universidad de Utah.

1. Tipo de transgénico → Ratones Knockout

2. Método que uso:
     a) Aislo células madre embrionadas de raton marrón con gen OhNo normal y añadio una copia de un gen mutado inactivo genOhNo y gen marcador.
     b) Los genes similares intercambian lugares, el gen marcador OhNo se incorpora al genoma por RECOMBINACION HOMOLOGA, y las células sin marcador mueren.
     c) Se crean los ratones quiméricos que tienen parches de células de todo el cuerpo, que crecieron a partir de células madre marrones.

3. ¿Para qué se utilizo el transgenico?
Para obtener información sobre como estos genes determinan patrones corporales. Ademas de estudiar los ratones para determinar la forma en que carece el gen OhNo puede afectar a los ratones, en los ataque de pánico.

ADN Recombinante Artificial en Neumonia

La vacuna NDV-3 contiene la porción N-terminal de la adhesina e invasina de C. albicans ""aglutinin like sequence 3 protein" (Als3p) con hidróxido de aluminio como coadyuvante en solución salina tamponada con fosfato. Estudios pre-clínicos demostraron que la vacuna contra el antígeno Als3p protege a ratones contra candidiasis orofaríngea, vaginal y sistêmica, así como infecciones de piel y tejido blando por S. aureus.

El componente activo de la vacuna NDV-3 es la versión recombinante de la región N-terminal (416 aminoácidos) de Als3p de C. albicans, con la adición de una cola de 6 histidinas y secuencias de unión. La proteína Als3p se obtuvo mediante fermentación a gran escala (100L) de una línea celular de Saccharomyces cerevisiae que expresó la proteína, y luego fue cosechada por centrifugación y purificada con columnas de cromatografía, concentrada y filtrada, obteniéndose una proteína monomérica con una pureza de 99%.

Referencia: - http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0716-10182013000100021&script=sci_arttext

- http://www.ecoportal.net/var/ecoportal_net/storage/images/objetos_relacionados/imagenes/articulos/19-4d/1967665-1-esl-ES/19-4d_large.jpg

ADN Recombinante en la Naturaleza

La recombinación genética es un proceso biológico que se produce normalmente en todos los organismos, tras el cual se produce un cambio del genoma (patrimonio genético del que está dotado un organismo) y se verifica normalmente con la rotura y la reunión del ADN.

La recombinación de eucariotas comúnmente se produce durante la meiosis como entrecruzamiento cromosómico entre los cromosomas apareados. Este proceso conduce a que la progenie tenga diferentes combinaciones de genes de sus padres y puede producir alelos quiméricos. En biología evolutiva se cree que esta mezcla de genes tiene varias ventajas, incluyendo que permite a los organismos que se reproducen sexualmente. En biología molecular,"recombinación" también se refiere a la recombinación artificial y deliberada de piezas de ADN distintas, a menudo de diferentes organismos, creando lo que se llama ADN recombinante.

Enzimas llamadas recombinasas catalizan las reacciones de recombinación natural. RecA, la recombinasa encontrada en Escherichia coli, es responsable de la reparación de las roturas en el ADN de doble hebra. En levaduras y otros organismos eucariotas hay dos recombinasas requeridas para reparar esas roturas. La proteína RAD51 es requerida para la recombinación mitótica y meiótica y la proteína DMC1 es específica de la recombinación meiótica.

Referencias: 

- http://www.ivu.org/spanish/trans/ssnv-genetic.html

- https://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-genetica

- https://blogger.googleusercontent.com/img/b/R29vZ2xl/AVvXsEiKevq2gd4geT5tRJ8yLmY3OnNy3wclFPjHsNS1h3oBR84_5WEz7HhTIr4s406M13w0wFT97pFVDQmIcx3jxu6k10vM2W1hhqo3z56PzsF4EHuMiDecJfWC4WcZFBHiAlkpvPjE1bSAi1c/s1600/Imagen2.png

Técnica de Hibridación en Neumonia

Se realizó la prueba OligoDetect®–Mycoplasma pneumoniae (Chemicon), con una mezcla de iniciadores que amplificaron una secuencia de 143 pb del gen ATPasa de M. pneumoniae. Cada reacción tenía un volumen final de 25 µl que contenía una concentración de 200 µM de dATP, dGTP, dTTP y dCTP, 2.5 U de Taq polimerasa, 3 mM de MgCI2, 0.3µM de la mezcla de primers y buffer 1X. Después de una desnaturalización inicial por 1 minuto a 94°C, se realizaron 40 ciclos de desnaturalización por 1 minuto a 94°C, anillaje a 45°C por 30 segundos y elongación a 72°C por 1 minuto. Posteriormente se realizó una extensión final por 8 minutos a 72°C en un ter–mociclador Cycler (Bio–Rad).

La prueba de hibridación in vitro diseñada para detectar la región amplificada del gen de la ATPasa, consistió en una denaturación bajo condiciones alcalinas seguida de una hibridación, cuyos resultados eran determinados mediante la absorbancia de los controles y las muestras.

La aplicación de la técnica molecular usada, PCR–hibridación in vitro, demostró ser de gran utilidad para la detección de M. pneumoniae en hisopados orofaríngeos, ya que la presencia de ácidos nucleicos de M. pneumoniae es frecuente en las muestras respiratorias estudiadas.

Referencia:http://scielo.unam.mx/scielo.php?pid=S0187-75852005000400002&script=sci_arttext

Detección de Mycoplasma pneumoniae mediante PCR–hibridación in vitro

T: Detección de Mycoplasma pneumoniae mediante PCR-hibridación in vitro en niños con infección respiratoria.

O: Detección de M. pneumoniae en hisopados orofaríngeos mediante la técnica de PCR-hibridación in vitro para contribuir a la implementación de estrategias diagnosticas que permitan un mejor conocimiento de la situación real de las infecciones respiratorias causadas por él, y el establecimiento de pruebas útiles para un diagnostico preciso que permita una terapéutica específica.

M: Exudado orofaríngeo.

AN: ADN bacteriano extraido con el Kit QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN®)

G: ATPasa de M. pneumoniae.

PCR: PCR-hibridación in vitro.

          D: 40 ciclos por un 1min a 94°.

          H: 72° por 1min.

          E: 45° por 30 segundos en un termociclador Cycler (Bio-Rad).

V: Electroforesis en geles de agarosa al 1.5% teñidos con bromuro de etidio.

C+: Control de amplificación del Kit.

CN: -
C-: Agua bidestilada estéril.

CB: Agua bidestilada estéril.

FP: -

FN: -

S: -

E: -

Referencia: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-75852005000400002